防腐劑廠家《化妝品用化學原料熒光素滲漏試驗步驟》

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來源： | 發布日期：2024-01-19

化妝品為什么需要測化學原料熒光素滲漏試驗，目的為了預測和評價化妝品用水溶性化學原料對眼睛是否具有強刺激性或腐蝕性。

化妝品

防腐劑廠家以下具體介紹化妝品用化學原料熒光素滲漏試驗步驟：

一、細胞建模

1.細胞復蘇

2. 接種細胞于含10%胎牛血清且不含酚紅的DMEM-F12（1：1）混合培養液中，每天觀察細胞生長狀態，穩定傳2代后準備建模。

3.用胰酶-EDTA（0.05% w/v胰酶，0.02% w/v EDTA）消化細胞，收集細胞于離心管中，800～1000 rmp/min離心5 min，重新懸浮細胞于培養液中，調整細胞濃度為4×10⁵ 個/mL。

4.取無菌24孔板每孔加入400 μL新鮮培養基，將嵌入型細胞培養皿transwell（嵌入型細胞培養皿厚度為80～150 μm，孔徑約0.45μm）放入24孔板中，注意避免氣泡。其中21個transwell內室中加入400μL 細胞懸液（終濃度約1.6×10⁵個/transwell），剩余3個transwell中加入同體積的培養液。將24孔板放入37 ℃ 5%CO₂培養箱中培養96 h 后，檢測前一天transwell內外換新鮮培養液。

二、染毒和清洗

以400 μL/孔預熱至37 ℃的HBSS（無酚紅）清洗transwell內室2遍。以200 μL/孔的受試物濃度梯度溶液進行染毒，染毒時間為1 min，每個濃度做3個復孔，染毒后以400 μL/孔預熱至37 ℃的HBSS（無酚紅）清洗transwell內室2遍。同時空白對照、陰性對照和陽性對照做相應的處理。